Решение задач «решить 5 задач по генной инжинерии»,
Генная инженерия, медицина

1. Рестрикционный фермент BamI разрезает ДНК по последовательности ГГАТЦЦ. Насколько часто этот фермент будет разрезать двухцепочечную ДНК? 2. Перед молекулярными генетиками стояла задача размножить при помощи ПЦР, а также клонировать в плазмиде pUC 18 структурный ген дрозофиллы длиной 1 кб. Ниже приведены только первые и последние 15 нуклеотидов, представляющие соответственно начало и конец данного структурного гена: 5’-АТГГАЦААТЦАГГАГ … … АГАТЦГТТГЦЦТТАА-3’. Какова должна быть последовательность двух праймеров, с помощью которых можно провести амплификацию указанного гена методом ПЦР? Как нужно модифицировать праймеры для того, чтобы после амплификации встроить ген дрозофилы в плазмиду по сайтам Eco RI и Hind III? 3. В плазмиде pUC18 имеется полилинкерный участок, который содержит сайты рестрикции для 10 различных рестриктаз. Можно ли встроить в эту плазмиду приведённые ниже фрагменты двухцепочечной ДНК? 5’-ЦЦГААТТЦАГАТГТААГГЦААТАГТГТГААТТЦАЦА-3’ 3’-ГГЦТТААГТЦТАЦАТТЦЦГТТАТЦАЦАЦТТААГТГТ-5’ 5’-ЦЦТТААГЦТТАГГЦТААГГЦААТАГААГЦТТТЦААТГ-3’ 3’-ГГААТТЦГААТЦЦГАТТЦЦГТТАТЦТТЦГАААГТТАЦ-5’. 4. Исследователи для клонирования важного фрагмента человеческой ДНК величиной 1кб использовали плазмиду pUC18. Трансформированные гибридной плазмидой клетки E. Coli были помещены на питательную среду, содержащую X-Gal. После культивирования в чашках Петри появились колонии синего и белого цвета. Удалось ли встроить нужный фрагмент человеческой ДНК в плазмиду pUC18? 5. Ген для белка ?-тубулина был получен из грибка Neurospora, вставлен в кольцевую плазмиду и клонирован в бактерии E.coli. Опишите шаг за шагом последовательность действий, необходимых для того, чтобы клонировать этот ген от родственного грибка Podospora, используя в качестве вектора кольцевую плазмиду pBR, представленную на рисунке 11, которая несет два гена устойчивости к антибиотикам канамицину (kan) и тетрациклину (tet).